牛乳铁蛋白(LT)酶联免疫分析

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛乳铁蛋白(LT)水平。用纯化的牛乳铁蛋白(LT)

抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入乳铁蛋白(LT)再与 HRP 标

记的乳铁蛋白(LT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB

显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深

浅和样品中的乳铁蛋白(LT)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上

2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心

20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次

3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞

浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分

钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备

用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器

将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上

7. 不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在第一、第二孔中分别加标

准品 100l,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50l,混匀;然后从第一孔、第二

孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50l,

混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉,再各取50l分别加到第五、第六孔

中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,萨顿联混匀;混匀后从第五、第六孔中各

取 50l 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50l,混

匀后从第七、第八孔中分别取 50l 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准

品稀释液50l,混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉。(稀释后各孔加样量都为50l,

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10l(样

品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,
更多精彩尽在这里,详情点击:http://binlinmuye.com/,萨顿联尽量不触及孔壁,轻轻晃动混

4. 配液:将 30(48T的 20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的 20倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50l,再加入显色剂 B50l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10. 终止:每孔加终止液50l,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值

大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计

① 凡本网注明来源:中国教育装备采购网的所有作品,版权均属于中国教育装备采购网,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用。已获本网授权的作品,应在授权范围内使用,并注明来源:中国教育装备采购网。违者本网将追究相关法律责任。

② 本网凡注明来源:XXX(非本网)的作品,均转载自其它媒体,转载目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,且不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。如其他媒体、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的稿件来源,并自负版权等法律责任。

③ 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。

北京市公安局海淀分局备案第1101083696号京ICP证050368号

发表评论

电子邮件地址不会被公开。 必填项已用*标注