杰尼巴尼特的资料

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展开全部杰尼.巴尼特 罗依-李的父亲是医生,母亲是教师,他毕业于乔百治华盛顿大学政治系和美国大学法律学院,此后他担任过律师。但他并未成为“纽约律师”,而是成为了“好莱坞制片人”。萨顿联罗依-李,现在我们也该记住他的名字了,他计划到明年完成14部翻拍作品。

电影制作公司“Vertigo娱乐公司”成立于2001年,仅有6名职员。目前在好莱坞,该公司的名称和创始人“罗依-李(Roy Lee)”的名字已耳熟能详。因为,对好莱坞制作人而言,通过具有亚洲度人感受和人缘的他,才能找到可版以翻拍的亚洲电影。在好莱坞,他的绰号是“翻拍王”。

被誉为“经典恐怖电影”的《姊魅情深》也被罗依-李看中,将于年内完成翻拍制作。在好莱坞《触不到的恋人》(原片《时越爱》)是他首次翻拍韩国电影的作品也是罗依-李制作的。翻拍李炳宪和李美妍主演的《中毒》的《Addicted》也将按照原著进入制作阶段。女主角由莎拉-米歇尔-盖拉担任。《我的野蛮女友》、《我的老婆是大佬》也通过他的推荐分别介绍到DreamWorks和Miramax制作公司,现在正在进行制作。

展开全部美国作家,其作品有爱之链,入选苏教版小学六年级上册语文课本.爱之链的资料

有人说,爱是一盏灯,黑暗中照亮前行的远,爱是一首诗,冰冷中温暖渴求的心房,爱是夏日zhidao的风,是冬日的阳,是春日的雨,是秋日的果。我说爱更是一根心链,栓紧你我彼此的心,串起了一个个爱的故事。

乔依是十分认真且负责任的不计任何报酬的帮助了那位老人。我感觉到了人格的魅力和人性回的本质。

老妇人帮助女店主是因为他也是一位善良的人且被乔依深深感动着“如果您遇上一个需要帮助的人,就请您给他一点帮助吧”很朴实的话。

我对爱之链的理解很简单。这世界充满着爱。你去爱别人别人就会来爱你。你不去爱别人别人也可能爱你。但是只有相互的爱才是真正的爱,

在乔依困难的时候,他曾经得到过别人爱的帮助,所以当他看到被困雪地,孤立无助的老妇人需要答帮助时,不容质疑地伸出援助之手。他不求报酬,只希望老妇人也能把悠悠爱心传递给需要帮助的人。

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杰尼巴尼特是谁 他创作了什么作品

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展开全部乔纳森·巴尼特凯(1946年,美国南卡罗来纳州萨姆特 ),简称为杰尼巴尼特,美国音乐家、作家。

展开全部杰尼·巴尼特e5a48de588b6e79fa5e3565罗依·李 电影制作公司“Vertigo娱乐公司”成立于2001年,仅有6名职员。目前在好莱坞,该公司的名称和创始人“罗依·李(Roy Lee)”的名字已耳熟能详。因为,对好莱坞制作人而言,通过具有亚洲人感受和人缘的他,才能找到可以翻拍的亚洲电影。在好莱坞,他的绰号是“翻拍王”。 这次他凭借翻拍香港电影《无间道》的《无间岛风云》而成为热点人物,但他本来是资深制作人。甚至可以说亚洲恐怖电影基本上都是经过他翻拍后走进了美国。日本恐怖电影的代表作《午夜凶铃》、《咒怨》都是通过他的翻拍而获得影评家的好评和票房成功。罗依·李最喜欢的电影是《驱魔人》,最喜欢的电视剧是《双峰》,他是一个恐怖电影爱好者。 被誉为“经典恐怖电影”的《姊魅情深》也被罗依·李看中,将于年内完成翻拍制作。在好莱坞《触不到的恋人》(原片《时越爱》)是他首次翻拍韩国电影的作品,这也是罗依-李制作的。翻拍李炳宪和李美妍主演的《中毒》的《Addicted》也将按照原著进入制作阶段。女主角由莎拉-米歇尔-盖拉担任。《我的野蛮女友》、《我的老婆是大佬》也通过他的推荐分别介绍到DreamWorks和Miramax制作公司,现在正在进行制作。 罗依-李的父亲是医生,母亲是教师,他毕业于乔治华盛顿大学政治系和美国大学法律学院,此后他担任过律师。但他并未成为“纽约律师”,而是成为了“好莱坞制片人”。罗依·李,现在我们也该记住他的名字了,他计划到明年完成14部翻拍作品 。

展开全部杰尼·巴尼特罗依·李 电影制作公司“Vertigo娱乐公司”成立于2001年,仅有6名职员。目前在好莱坞,该公司的名称和创始人“罗依·李(Roy Lee)”的名字已耳熟能详。因为,对好莱坞制作人而言,通过具有亚洲人感受和人缘的他,才能找到可以翻拍的亚洲电影。在好莱坞,他的绰号是“翻拍王”。 这次他凭借翻拍香港电影《无间道》的《无间岛风云》而成为热点人物,但他本来是资深制作人。甚至可以说亚洲恐怖电影基本上都是经过他翻拍后走进了美国。日本恐怖电影的代表作《午夜凶铃》、《咒怨》都是通过他的翻拍而获得影评家的好e799bee5baa6e78988e69d4评和票房成功。罗依·李最喜欢的电影是《驱魔人》,最喜欢的电视剧是《双峰》,他是一个恐怖电影爱好者。 被誉为“经典恐怖电影”的《姊魅情深》也被罗依·李看中,将于年内完成翻拍制作。在好莱坞《触不到的恋人》(原片《时越爱》)是他首次翻拍韩国电影的作品,这也是罗依-李制作的。翻拍李炳宪和李美妍主演的《中毒》的《Addicted》也将按照原著进入制作阶段。女主角由莎拉-米歇尔-盖拉担任。
更多精彩尽在这里,详情点击:http://binlinmuye.com/,萨顿联《我的野蛮女友》、《我的老婆是大佬》也通过他的推荐分别介绍到DreamWorks和Miramax制作公司,现在正在进行制作。 罗依-李的父亲是医生,母亲是教师,他毕业于乔治华盛顿大学政治系和美国大学法律学院,此后他担任过律师。但他并未成为“纽约律师”,而是成为了“好莱坞制片人”。罗依·李,现在我们也该记住他的名字了,他计划到明年完成14部翻拍作品 。萨顿联

雅各布·巴尼特(Jacob Barnett)2岁时被

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雅各布·巴尼特(Jacob Barnett),2岁时被诊断患有中度至重度自闭症,现在正在攻读量子物理学硕士学位。年幼的雅各布多数时候都不说话。萨顿联但是当他开口说话时,他能用四种语言交流。….他一直专注于自己的相对论理论研究,…“他的研究领域涉及多个天体物理学和理论物理学中最棘手的问题,”

从去年9月份起,中国国家游泳队就开始了封闭训练,100多天单调的训练中,队员们通过什么来调节呢?

赌王女儿何超盈曾说自己在爸爸房里看过此片:「我第一次看这部戏是与爸爸一起,当时我9、10岁,妈咪问我电视里的像谁?一看发型样子像爹地,我有问爹地剧情是不是真的?是不是真有枪指住 ​​​​…展开全文

MichaelFassbender超话【纪录片】第三部分更新!Michael在2019年5月参加Rally of The Lakes比赛纪录片的最后部分。萨顿联

Michael发文:感谢每一个花时间观看了Rally of The Lakes 第一和第二部分的人。我们拍摄这部纪录片的时候非常开心,为Paul Nagle 和 Cragig Breen欢呼!他们的支持意义重大。

巴尼特_巴尼特赛程阵容资料_英格兰 – DS足球

巴尼特是一支来自英格兰的足球俱乐部,英文名为Barnet。巴尼特参加了英国友谊赛、英格兰足球协会超级联赛、英格兰足总杯、英格兰乙级联赛、联赛杯、英格兰Johnstone’s Paint杯、英格兰联赛杯、英格兰联赛锦标赛、英格兰全国联赛、英格兰足总杯预选赛、英格兰足总锦标赛、俱乐部友谊赛赛事等足球比赛。在最近15场的比赛中,巴尼特取得了7胜,7平,1负的成绩。

里科-亨利能否在周二晚上与巴内特的足总杯第四轮重赛中出场还是个疑问。这名左后卫在周六英冠联赛5-2战胜布莱克本的比赛中场休息时受伤下场,他的队友索耶斯在几周前3-3的那场平局中显得小心翼翼。“足总杯真的很神奇,在第一场比赛中,我们可能有点震惊,但现在我们了解…

巴尼特位于伦敦北部,他们的主场别号“蜂巢体育场”,没错来自伦敦西南部的自治市豪恩斯洛的英冠球队布伦特福德绰号也是蜜蜂。前者成立于1888年,而后者成语于1889年。主队巴尼特的色调是琥珀加黑;客队布伦特福德的色调为红色。萨顿联本场比赛也是伦敦德比。英冠…

卢顿:新赛季至今,卢顿还没有遭遇强队,未来赛程将连续面对联赛中的其他中上游球队。本周末卢顿的联赛对手是来自前三、比自己排名还要高的阿克灵顿,主帅预计本场英锦赛俱乐部的排兵布阵会受到影响。卢顿阵中不乏进攻好手,其中从克劳利转会过来的科林斯继续延续上赛季的火热状态,至今已经…

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2018-2019英议联联赛

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人教版高中生物必修2导学案:22基因在染色体上(无答案)

第二节基因在染色体上 学习目标 学习萨顿的假说的内容 基因位于染色体上的实验证据 基因的分离定律的实质 基因的自由组合定律的实质 学习难点 孟德尔遗传规律的现代解释,分离定律和自由组合定律 课前自我预习 一、萨顿的假说(阅读教材P27~P28) 1.内容:基因是由 携带着从亲代传递给下一代的。也就是说,基因就在染色体上。 2.依据:基因和染色体行为存在着明显的 关系。 二、基因位于染色体上的实验证据(阅读教材P28~P30) 1.实验现象 实验现象的解释 3.实验现象解释的验证方法: 。
更多精彩尽在这里,详情点击:http://binlinmuye.com/,萨顿联 4.实验结论:基因在染色体上。 三、孟德尔遗传规律的现代解释(阅读教材P30) 1.基因的分离定律的实质 (1)在杂合子的细胞中,位于一对同源染色体上的 ,具有一定的独立性。萨顿联 (2)在减数分裂形成配子的过程中,等位基因会随 ,分别进入两个配子中,独立地随配子遗传给后代。萨顿联 2.基因的自由组合定律的实质 ( [来自e网通客户端]

1.内容:基因是由 携带着从亲代传递给下一代的。也就是说,基因就在染色体上。

(2)在减数分裂形成配子的过程中,等位基因会随 ,分别进入两个配子中,独立地随配子遗传给后代。

(2)在减数分裂过程中,同源染色体上的 彼此分离的同时,非同源染色体上的 自由组合。

(4)蝗虫体细胞中的24条染色体,12条来自父方,12条来自母方。( )

(6)由于控制果蝇眼色的基因只存在于X染色体上,所以该基因在遗传过程中不遵循基因的分离定律。( )

1、果蝇的大翅和小翅是一对相对性状,由一对等位基因A、a控制。现用大翅雌果蝇和小翅雄果蝇进行交配,再让F1雌雄个体相互交配,实验结果如下:

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麦当劳“毒奶茶”事件消毒水哪能随便用?

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前往机场接机,顺便在机场麦当劳店吃了个夜宵,没想到却吃出问题来了。前天晚上11时许,萨顿联福清的唐先生夫妇到机场接小姨子回家,并在机场麦当劳店吃了夜宵,不料妻子黄女士在喝下店内的珍珠奶茶后,就出现呕吐,喉咙、肠胃等灼烧般疼痛的情况。随后,黄女士被送往医院,经医院检查初步诊断为误食消毒剂,造成化学性消化道损伤。(4月15日《海峡都市报》)

在机场吃个快餐、喝杯奶茶,咋就紧急住进了医院,而且还被诊断为消毒剂损伤消化道?这消毒剂从何而来?怎么跑到顾客的奶茶杯里了?试问这究竟是消毒还是投毒?根据报道,很有可能是由于这家麦当劳店消毒剂使用不当导致与奶茶“串杯”。

作为24小时营业的公共餐饮场所,它的卫生状况直接关系到食品安全与消费者的身体健康,因此店家按时对餐饮设备进行定期消毒确实很有必要,可是任何保洁、清理与消毒都必须按照规程正确实施,而不能随意乱来。

要知道,这些打理卫生和消毒的产品都是化工材料,它们在清洁、消毒、杀菌的同时,自身也有毒性,如果使用不当或清洗不彻底,很可能会对人体产生伤害,这样一来不就从消毒变成了某种意义上的“放毒”吗?

显而易见,如果这位黄女士真是因为奶茶中的消毒剂成分而被“毒倒”,那这家店不是使用了不安全的消毒剂,就是在不该使用消毒剂冲洗的食品设施中用了消毒剂,要么则是超标过量使用消毒剂,然后又没有充分清洗,从而造成过量消毒剂成分进入食客喝掉的“奶茶”中引发事端。

如果是这样的话,这件事显然不能只当作偶发个案轻轻放过。对于麦当劳来说,作为一家全球知名快餐连锁机构,出现这样的事情充分说明它们内部管理和消毒工序存在严重问题。如此滥用消毒剂且不加清洗,这不是害人吗?

这位黄女士可能只是恰好喝了消毒剂成分浓度最高的“午夜第一杯”奶茶所以才会有如此大的反应,那他们天天这样干,还有多少受此毒害却毫不知情的受害者?因此不仅是这家机场店,整个麦当劳对此也要深刻反思、彻底整改。

还有对于其它餐饮企业来说,难道就可以高高挂起了吗?恐怕未必!消毒剂、洗洁精这些谁家没在用?敢说别的餐饮店后厨就不存在过量和不当洗涤、消毒的问题?难道不也应该从此事件中深刻吸取教训吗?

诚然,洗洁精、消毒剂这些不可不用,然而也不能滥用和不当使用,否则反而会对食客产生新的危害尤其是一些潜移默化、萨顿联日积月累的严重伤害。对此,不光麦当劳和其它餐饮企业要自查自纠,也应引起有关部门的高度重视。

要出台科学、规范的食品接触用消毒剂使用规程,什么能用、什么不能用,以及用多少和用在哪里,还有用了之后又该如何清洗,包括对消毒剂滥用的判定和处罚,这些都应一一加以明确,做到有法可依、有章可循和有度可量才行。不能用多用少凭感觉、过不过量靠猜测。

杰尼·巴尼特

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乔纳森巴尼特凯(1946年,南卡罗来纳州萨姆特 ),简称为杰尼巴尼特,美国音乐家、作家。

乔纳森·巴尼特凯(1946年,美国南卡罗来纳州萨姆特 ),简称为杰尼巴尼特,美国音乐家、萨顿联作家。

在20世纪70年代,他作一些开幕的演出,如Tom Waits的,Cheech和冲,和弗兰克·扎帕的演出。他还出现在1975年的影片纳什维尔,并在Cheech和冲的下一部电影arnett的作品之一,“一脚踏在蓝军”,是记录由约翰尼·亚当斯和获得从1997 WC手持蓝军奖年度奖一个蓝调歌曲。

巴尼特也写了一个简短的故事题为“链爱“。他和作曲家罗伊·李Feek公司将这个故事改编成歌曲“ 爱之链 “,这是在2000年的前5排名。这首歌是基于一个现实生活中的事件。

[1]苏教版国标本第十一册[M]爱之链. 江苏:江苏教育出版社, 2015:39-40

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酶联免疫法

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1971年瑞典学者Engvall和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,即酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 ,它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。

Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:

③酶作用的底物(显色剂)。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。

⒈正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

⑴固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。当前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

⑵包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃、18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD(optical density-光密度)值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

⑶酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

⑷酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。

一、将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。

二、加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

三、加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

四、加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

根据同样原理,将大分子抗体分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。

在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAgHBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步法检测。

在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同,如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。

假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,显然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。

双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab)或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而可消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标(参见6.2)。

双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。

反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。

在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

在一步法测定中,应注意钩状效应(hookeffect),类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成夹心复合物,所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:

⑴将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。

⑵加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合,在洗涤过程中被洗去。

⑶加酶标抗抗体:与固相复合物中的抗体结合,从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体,可用酶标羊抗人IgG抗体。

本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。

间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果,但应尽可能予以纯化,以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质,例如以i为工程酶的重组抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能与受过E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质,例如来自人血浆或人体组织的抗原,如不将其中的Ig去除,试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白,也会因竞争吸附而影响包被效果。

间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强,非特异IgG可直接吸附到固相载体上,有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中,抗原包被后一般用无关蛋白质(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封闭(blocking)固相上的空余间隙。另外,在检测过程中标本须先行稀释(1:40~1:200),以避免过高的阴性本底影响结果的判断。

竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下:

⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。

⑶加底物显色:参考管中由于结合的酶标抗原最多,萨顿联故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差,代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡,表示标本中抗原含量越多。一般情况,是通过,检测培养体系的峰电流,通过峰电流与抗原抗体的线性关系来最终确定体系的最终检测目标的浓度。

当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。

血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在,后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法,先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下:

⑵加入稀释的血清标本:保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。

⑸加底物显色:如有颜色显示,则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在,是为阳性反应。

亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合。维生素H,分子量244.31,存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物,生物素-羟基琥珀亚胺酯(biotin-hydroxysuccinimide,BNHS)可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大,两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置,可以连接更多的生物素化的分子,形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来,就可大提高ELISA的敏感度。

亲和素-生物素系统在ELISA中的应用有多种形式,可用于间接包被,亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素,原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合,通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量,而且使其结合点充分暴露。另外,在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代,然后连接亲和素-酶结合物,以放大反应信号。

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:

⑷阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);

用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。当前应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用最广。

过氧化物酶广泛分布于植物中,辣根中含量最高,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(HRP),是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白(含糖量18%),分子量约40 000,约由300个氨基酸组成,等电点为pH 3-9,催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的最大吸收光谱分别为275nm和403nm。

纯酶的RZ多在3.0以上,最高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶,非酶蛋白约占 75%,不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢,催化反应时的供氢体有几种:(1)邻苯二胺(OPD),产物为橙色,可溶性,敏感性高,最大吸收值在490nm,可用肉眼观察判别,容易被浓H2SO4终止反应,颜色可在数小时内不改变,是目前国内ELISA中最常用的一种;(2)联大茴香胺(OD),产物为橘黄色,最大吸收值在400nm,颜色较稳定;(3)5-氨基水杨酸(5-AS):产物为深棕色,最大吸收值在449nm,部分溶解,敏感性较差;(4)邻联甲苯胺(OT)产物为蓝色,最大吸收值在630nm,部分溶解,不稳定,不耐酸,但反应快,颜色明显。

系从小牛肠粘膜和大肠杆菌中提取,由多个同功酶组成。它们的底物种类很多,常用者为硝基苯磷酸盐,廉价无毒性。酶解产物呈黄色,可溶,最大吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反应系统中,37℃1分钟水解1μg磷酸苯二钠为一个单位。

酶与抗体交联,常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为:将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中,加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠(NaIO4)水溶液0.5ml,混匀置4℃冰箱30分钟 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室温放置30分钟后加入含5(g纯化抗体的水溶液1ml,混匀并装透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时(或过夜)使之结合,然后吸出,加硼氢化钠(NaBH4)溶液( 5(g/ml)0.2ml,置4℃冰箱2小时,将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵溶液,置4℃冰箱30分钟后离心,将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中,并对之透析过夜(4℃),次日离心除去不溶物,即得到酶标抗体,用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml,进行测定后,冷冻干燥或低温保存。

酶标抗体标记效果测定:测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。

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高考生物知识点:萨顿假说内容

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萨顿的假说内容是高中生物必备的知识点,同学们在学习中一定要掌握这一知识点,以下高中网校小编整理的萨顿的假说内容,供同学们参考学习。

基因在最早的时候对于人类来说,是一个神奇的东西。虽然很多人猜想到了人类的遗传是由一种叫作基因的东西决定的。但是基因是什么,在人体的哪个地方,因为当时科学条件的限制可以说一无所知,下面来看看萨顿假说。

萨顿假说的提出,分成这样几个逻辑阶段:归纳蝗虫等生物染色体存在和行为特点的实验事实→比较染色体和基因的存在和行为特点,发现二者的共存和共变规律(平行关系)→初步提出“基因在染色体上”的假说→演绎假说,解释更多类似实验事实→假说进一步确立。

在当时的那个社会,萨顿联萨顿假说的提出可以说是非常具有进步意义的。同时也是给当时的人们带来了很多的争议,因为会响起很多反对的声音。